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大鼠肌源性干细胞
大鼠肌源性干细胞
Product Introduction
1.产品名称:大鼠肌源性干细胞
2.组织来源:肌肉组织
3.产品规格:5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介:
大鼠肌源性干细胞分离自肌肉组织;肌源性干细胞(MDSCs)属于成体多能干细胞,具有多细胞系分化和自我更新能力。通过诱导刺激,MDSCs可以分化为脂肪、骨骼、软骨、平滑肌和神经细胞等多种细胞和组织类型;作为基因治疗和组织工程的供体细胞,已成为治疗心肌梗死、Duchenne氏肌营养不良等疾病的研究热点;近年来,肌源性干细胞在治疗尿失禁等方面的应用逐步得到重视。需注意的是,肌源性干细胞主要存在于骨骼肌组织中,只是成熟组织的很少部分细胞;平时处于静止状态,在细胞应激和组织缺失时才会激活;并且随着年龄的增加,所含细胞数量逐渐减少,而目前临床疾病的治疗主要是针对成体进行。肌源性干细胞的体外扩增对细胞移植和干细胞介导的基因治疗至关重要。对肌源性干细胞的扩增研究发现,EGF、FGF-2和SCF可以通过减数分裂或促使不分裂细胞进入有丝分裂周期,从而刺激细胞增生。更重要的是,细胞因子诱导的体外扩增可以通过自我更新不刺激细胞分化,从而保持干细胞表型。
本公司生产的大鼠肌源性干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶-胰蛋白酶联合消化法结合密度梯度离心、差速贴壁法,最后通过肌源性干细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经CD34、Desmin、CD45免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息:
DMEM[H]、FBS、HS、Chicken Embryo Extract(CEE)、Penicillin、Streptomycin等
同时,YBio还建立了严格的细胞鉴定流程,所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测,保证细胞纯度在90%以上;同时也需经过微生物检测,保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 

二.使用方法 

1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作: 

取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜,以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。 

2、细胞传代: 

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次; 

2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1500rpm/min,离心5min; 

3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养; 

4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存: 

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次; 

2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落,再加入完全培养液终止消化,然后将悬液转移至15ml离心管中,1500rpm/min,离心5min; 

3)用适当量的冻存液(基础培养基:FBS:DMSO=7:2:1)重悬细胞,并放置于冻存管中; 

4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。 

    

4、细胞复苏: 

1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具), 快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁; 

2)将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中,滴加入完全培养液5ml混匀细胞,然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中; 

3)放置于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养; 

4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。 

  

三.注意事项 

1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月; 

2、在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作; 

3、原代培养的细胞,不建议多次传代后进行实验。如果您的实验时间较长, 请在收到细胞后传代时,按细胞量分种2瓶,使用其中的一瓶细胞实验,其余的细胞先冻存起来。下次实验需要时,再复苏; 

4、该细胞只可用于科研



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