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2.组织来源:眼球组织
3.产品规格:5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介:
小鼠视乳头星形胶质细胞分离自视神经乳头;视乳头位于黄斑区鼻侧附近,境界清楚,呈白色、圆盘状,因此也称为视盘。视网膜上视觉纤维在此汇集,并于此穿出眼球向视中枢传递。视乳头中央有一小凹陷区,称为视杯或生理凹陷。视乳头是视神经纤维聚合组成视神经的起始端,它没有视细胞,因而没有视觉,在视野中是生理盲点。视乳头是开角型青光眼最早受损的部位,星形胶质细胞是视神经乳头处主要的胶质细胞类型,可为视网膜神经节细胞无髓鞘的轴突提供结构和生物支持。青光眼视神经病变是全球首位不可逆性致肓眼病。青光眼视神经病变以视网膜神经节细胞轴突丧失并伴有视乳头处细胞外基质重坦为主要特征。导致视网膜神经节细胞丧失的病理生理机制尚未完全阐明,神经胶质细胞对调控神经元微环境起多重作用,越来越多的证据表明胶质细胞町能对神经系统发育、损伤、修复及再生起极为关键的作用。视乳头星形胶质细胞胞体多扁平,体积较大,形状多呈不规则的多边形,突起较粗,胞核为椭圆形,核仁清晰可见,核周有较密集物质,胞质稀疏,骨架结构良好,明显不同于长梭形的成纤维细胞形态。
本公司生产的小鼠视乳头星形胶质细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法、结合差速贴壁制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经GFAP免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息:
DMEM[H]、FBS、胶质细胞生长添加剂、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
同时,YBio还建立了严格的细胞鉴定流程,所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测,保证细胞纯度在90%以上;同时也需经过微生物检测,保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
二.使用方法
1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜,以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1500rpm/min,离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落,再加入完全培养液终止消化,然后将悬液转移至15ml离心管中,1500rpm/min,离心5min;
3)用适当量的冻存液(基础培养基:FBS:DMSO=7:2:1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具), 快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中,滴加入完全培养液5ml混匀细胞,然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中;
3)放置于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
三.注意事项
1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月;
2、在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作;
3、原代培养的细胞,不建议多次传代后进行实验。如果您的实验时间较长, 请在收到细胞后传代时,按细胞量分种2瓶,使用其中的一瓶细胞实验,其余的细胞先冻存起来。下次实验需要时,再复苏;
4、该细胞只可用于科研;
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