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pPIC9K
Product Introduction
pPIC9K
| 质粒类型: | 毕赤酵母表达载体 |
|---|---|
| 表达水平: | 高拷贝 |
| 启动子: | AOX1 |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 9276 bp (查看载体序列) |
| 5' 测序引物及序列: | 5´ AOX1:5´-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3´； alpha-Factor-F: 5´-TACTATTGCCAGCATTGCTGC-3´ |
| 3' 测序引物及序列: | 3´ AOX1:5´-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3´ |
| 载体标签: | N-alpha factor |
| 载体抗性: | Ampicillin (氨苄青霉素) |
| 筛选标记: | HIS4 |
| 备注: | 利用alpha分泌因子，分泌表达蛋白。 |
pPIC9K载体中存在卡那抗性基因，允许利用卡那抗性在酵母体内筛选多克隆拷贝，载体其余部分与pPIC9载体完全一样。pPIC9K载体能够使用的毕赤酵母宿主菌是KM71和GS115。 pPIC9K载体详细信息如下：
- pPIC9载体大小9276 bp，是融合表达载体。
- 载体构建过程中，可供使用的单一限制性内切酶位点为SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I.
- 利用alpha因子分泌信号肽，分泌表达蛋白基因。
- 在载体构建过程中，你的基因必须保证与信号肽的起始密码子的读码框一致。
- 毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。
- 为了将基因插入GS115或KM71的AOX区, 使用SacI限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型)
- 为了将基因插入GS115或KM71的His4区, 使用Sal I或者Stu I限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+ Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型)
- 将基因插入GS115的AOX1区域，需要使用Bgl II线性化质粒 (产生His+MutS基因型)。
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