BL21(DE3) 快转感受态细胞

F-BL21(DE3) Chemically Competent Cell

产品规格:

F-BL21(DE3) 10×100μl

pUC19(control vector) 10pg/μl 10μl

基 因 型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)

BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7 启动子的表达载体(如 pET 系列)的基因。 λ噬菌体 DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶，该区整合于 BL21 的染色体上，所以称为 BL21(DE3)。可同时表达 T7 RNA

聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，用于 pET 系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达。 F-BL21(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，无需 42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min 内完成转化、涂板操作，

pUC19 质粒检测转化效率可达 1×107 cfu/μg DNA。

1. 提前 10 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热。

简 要 说 明

快速转化操作方法（10min）

2. F-BL21(DE3) 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA 并用手拨打 EP 管底

轻轻混匀，冰中静置 5 分钟。 3. 用 200 μl 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经 37℃预热的 LB 培养基上，涂均匀，表面无水渍。4. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。

1.F-BL21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA 并用手拨打 EP 管底

轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟（晃动会降低转化效率）。加入 700 μl 不含抗生素的 LB，37℃，

200 rpm 复苏 10 分钟，涂板（均匀，表面无水渍）。 3. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。

1.F-BL21(DE3) 感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb 质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作：感受

态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5 分钟后，加入目的 DNA 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰中静置 10 分钟。42℃水

浴热激 45 秒，迅速放回冰中静置 2 分钟。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 复苏 30 分钟，涂板。 2. F-BL21(DE3) 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转

化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可按热激转

化操作，增加孵育步骤。

产品优势

1、蛋白表达：适合表达非毒性蛋白

2、效率高：可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好：-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件： -80℃