EHA101 电击农杆菌感受态细胞

EHA101 Electroporation-Competent Cell

产品规格:

EHA101 10×50 μl

pK7WGF2 (control vector) 10 ng/μl 10 μl

基 因 型

C58 (rif r) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine

EHA101 菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自

身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基

因组必需的元件，pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体

T-DNA 顺利转移)。pEHA101 (pTiBo542DT-DNA) 型 Ti 质粒含有筛选标签：kan，赋予 EHA101 菌株卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、

烟草等植物的转基因操作。开发的 EHA101 电转感受态特别适用于大质粒的转化：经 pK7WGF2 质粒 (壮观霉素抗性，size:11876

bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA；经pK7WGF2-ZH质粒（size:40 kd）检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。

简 要 说 明

1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙醇充分挥发，

待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中 5 分钟，待其融化，加入 1-5 μg 质粒 DNA（质粒体积不大于 6ul，最好用

试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用 200 μl 枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击

杯中，盖上杯盖，空管保留待用。 3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为 Biorad 推荐，使用者也可按所用电转

仪推荐的 protocol 操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入 700 μl 无抗生素的 LB 并转

移到感受态空管中，28℃振荡培养 2~3 小时。4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB 平板上，倒

置放于 28℃培养箱培养 2-3 天 （当平板只含有转化所用双元载体抗生素时，28℃培养 48 小时即可；平板中同时加

入双元载体抗生素，20 μg/ml rif 时，需 28℃培养 60 小时；如果使用的平板含有 50 μg/ml rif 则需要 28℃培养

72-90 小时）。

加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一

倍，转化效率下降一个数量级。2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。-3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。

4. 利福平浓度不应高于 25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感

受态计算转化效率时所用平板只含有 50 μg/ml kan，若所用平板含有 20 μg/ml rif 则转化效率降低到 1/2。

5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入 Ti 质粒筛选抗生素可防止 Ti 质

粒丢失，但 Ti 质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti 质粒丢失的

概率极低(可以忽略)。

产品优势

1、蛋白表达：适合表达非毒性蛋白

2、效率高：可达到 107cfu/ug pUC19 DNA

3、稳定性好：-70 度冰箱可保存 6 个月时间

保存条件： -80℃