沉淀法miRNA分离试剂盒

产品及特点

microRNA(miRNA)和 RNA 干扰研究是当今分子生物学研究的一大热点，但快速分离和纯化相关的小 RNA 十分棘手，是目前研究 miRNA 的主要技术障碍之一。目前国外相关产品寥寥无几，并且基本采用先提总 RNA 再富集其中的小 RNA 的两步法策略，国内相关产品更是一片空白。基因为满足广大用户的需求，开发了具有自主知识产权的本产品，它具有下列特点：

1. 从总 RNA 中直接分离纯化小 RNA，不需要使用离心吸附柱。得到的小RNA 长度大部分在 200 nt 以下，包括 5S RNA、tRNA、 miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA 和 snRNA 等。

2. 操作简单快速，整个过程只需要约 30 分钟。

3. 小 RNA 纯净，OD260/280 一般都在 1.9 以上。

4. 可用于 RT-PCR、miRNA 标记、microarray 等后续实验。

5. 此方法能去除 90%左右的大 RNA，但会有少量残留大 RNA，如果需要纯度更高，可以选择 PAGE 回收法。
规格及成分 成 份 50 次包装 
溶液 A 5 mL 溶液 B 10 mL 溶液 C 50 mL RNase-free 水 10 mL 使用手册 1 份

运输及保存 常温运输.4℃保存，有效期一年。

自备试剂 RNase-free 塑料离心管。

使用方法 

1. 在纯化好的 100 uL 总 RNA（含大 RNA 和小 RNA）中，加入 50 uL溶液 A，振荡 30 秒混匀。如果 RNA 样品体积不足 100 uL，可以用RNase-free 水补足，如果体积超过 100 uL，可以用本公司核酸浓缩剂浓缩到 100 uL。

2. 室温 12000-15000 g 离心 30 分钟。小 RNA 在上清中，大 RNA 在沉淀中。注意：离心时间不能短于 30 分钟，否则大 RNA 沉淀不充分。

3. 小心将上清液转移到干净的 1.5 mL RNase-free 塑料离心管中。留下的沉淀可以用75%乙醇洗涤后做大 RNA 电泳对照用。

4. 在上清液中加入 200 uL 溶液 B，振荡 30 秒混匀。

5. 室温 12000-15000 g 离心 10 分钟，小心弃上清。由于溶液 B 中有惰性的助沉剂，所以得到的小 RNA 沉淀肉眼可见。

6. 加入 1 mL 溶液 C，震荡数秒。

7. 室温 12000-15000 g 离心 10 分钟，小心弃上清。

8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体（约 50 uL 左右）。

9. 在沉淀中（含小 RNA）加入 30-100 uL RNase-free 水，吹打溶解即得小 RNA 溶液。注意：不能只吹打管底部分，还需要吹打整个离心管管壁的离心面部分，因为上面也有小 RNA 沉淀。

10. 好先 PAGE-银染检测小 RNA 纯度再使用。