痰液DNAout

产品及特点

痰液是重要的临床样品，可以用于诊断肺癌，肺结核等各种疾病。但是从痰液中纯化 DNA 十分棘手，为此本公司开发了本产品，专用于从痰液或其他上呼吸道分泌样品中纯化 DNA，用于后续的分子生物学分析。本产品具有下列特点：

1. 每次可以处理 10-20 mL 痰液，得到 2-5 ug DNA。

2. 纯度高,可直接用于后续得 PCR 检测。

3. 一管式操作，减少污染，节约成本。

4. 含痰液保存液（溶液 A），便于取样和运输。

5. 无毒环保，不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有机溶液。
规格及成分 成 份 50 次大纸盒包装 
溶液 A（痰液细胞固定液） 500 mL 溶液 B（痰液解稠剂） 500 mL 溶液 C 30 mL 使用手册 1 份

运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂 异丙醇，70%乙醇。

使用方法 

一：痰标本的获取与保存（注意：痰液以及下列操作的废弃液都可能含有致病性的结核杆菌等致病菌，需按传染源相关规定流程进行操作）

1. 每例患者在常规痰标本采样时，好连续三天采集三次样品以防误差。具体做法是先在每个 50 mL 的痰液收集管内新鲜加入 10 mL 溶液 A 和 10 mL 溶液 B，待患者晨起漱口后，咳深部痰 7～8 口（约 10-20mL），收集到装有溶液 A 和溶液 B 混合液的痰液管收集内，混匀后储于 4℃冰箱或阴凉处。第二、三天重复此操作。取足三管后一起送实验室，4℃冰箱保存直到使用（一般不超过 7 天）。

2. 使用时，在室温反复振摇装有样品（总体积约 30-40 mL）的痰液收集管 5～10 分钟，充分混匀直到痰液中无粘稠痰块而呈均匀的液相。

3. 4℃2500g 离心 5 分钟，弃上清。

4. 沉淀再用自备的 PBS 液洗两遍。

5. 所得沉淀可以直接用于涂片，用于比较细胞形态学分析。也可以将细胞沉淀在 0.2mLPBS 缓冲液中重悬后转入 1.5 mL 螺旋盖塑料离心管，-20℃冰箱长期保存，或立即用于下步的 DNA 提取。为避免盖子崩开而出现交叉污染或痰液的分枝杆菌污染环境，建议不要使用压盖式塑料离心管。同时好设置一个阳性和一个阴性对照。

二：DNA 提取

6. 在上步所得的 0.2 mL 样品中加入 0.6 mL 溶液 C。溶液 C 容易形成沉淀，用前需37℃加热融化并摇晃均匀。

7. 室温放置 10 分钟。此间可以在每个管外壁上做个标记，以在下步区别向心面和离心面。

8. 振荡数秒后加入 0.7 mL 自备的异丙醇，旋紧盖后振荡 30 秒混匀。

9. 把离心管的向心面对向转头，13,000-15,000 g 室温离心至少 15 分钟。

10. 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的 DNA 沉淀（此时可能看不见）。

11. 加入 1.0 mL 70%乙醇, 振荡数秒后 15,000 g 室温离心 5 分钟。注意：在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。

12. 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的 DNA 沉淀（此时呈膜状沉淀）。

13. 将离心管放回离心机再短暂离心数秒, 然后用移液器移弃约 50 uL 残留液体（70%乙醇），否则它会影响后续反应。

14. 加入 200 μl RNase-free 水，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状DNA 沉淀，溶液将呈混浊状，含少量不溶，短暂离心后存上清（含 DNA）。

15. 直接取适量用于 PCR，样品使用量不超过 PCR 体系的 1/2。剩余 DNA 样品可以室温放置 2 小时，也可保存于-80℃保存一个月。