DNA粘转平试剂盒

英文名称:DNA Polishing Kit
产品简介:本产品利用Pfu DNA polymerase所具有3'到5'的聚合酶活性和5'到3'外切酶活性，将3'和(或)5'突出的DNA片段转化成平末端，用于克隆工作。
本产品利用Pfu DNA polymerase所具有3′到5′的聚合酶活性和5′到3′外切酶活性，将3′或5′突出的DNA片段转化成平末端，用于克隆工作。
产品特点：
1. 简单，精心优化过的2×Polishing Buffer中含有所需要的所有成分，不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA载体。
储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。
使用方法：
1. DNA片段的准备：
无论是来源Taq，Tth,T7，Klenow和Vent等DNA聚合酶合成的DNA片段，还是用限制性内切酶制备的DNA片段，粘转平之前均需要将DNA沉淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀DNA的方法包括经典的盐/纯沉淀法，离心柱DNA 吸附法和百奥莱博的一管式非醇超快DNA沉淀法。
2. 设置粘转平(Polishing)反应：
1. 简单，精心优化过的 2×Polishing Buffer 中含有所需要的所有成分，不需要单独准备。
2. 适用于任何平末端的DNA载体。
使用手册
在干净的0.5 mL或1.5 mL离心管中，分别加入回收的DNA片段(0.2-2μg)、25 μL 2×Polishing Buffer、1 μL Pfu DNA polymerase(3U/μL)并补水到50μL，72℃保温2小时即可。
注意：如果不使用热盖式PCR 仪器加热，则需要在反应管中再加入适量液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。
3.反应后处理
粘转平反应后，样品可以放-20℃长期保存，也可以直接用于T4 DNA连接酶催化的连接反应。对10μL的连接反应体系，一般需要加入1-2μL粘转平反应液。由于Pfu DNA polymerase在连接反应的温度条件下几乎没有活性，所以不必去除。但文献报道，去除后连接效率更高。