大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞

产品及特点 本产品来源于 Stratagene 公司的 BL21-Gold 菌株，缺少 Lon 蛋白酶和 OmpT 蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的 4 种稀有密码子( AGA、AUA、CCC、CUA) 对应的 tRNA （argU、ileY、proL、leuW），提高外源基因，尤其是富含 AT-或 GC- 的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区（DE3 区含有T7 噬菌体 RNA 聚合酶），可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，可用于 pET系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，氯霉素，链霉素，壮观霉素抗性。本产品由特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测转化效率高达 108cfu/μg。

菌株基因型为：F

- ompT hsdS (rB

-mB

-) dcm+ Tet

r galλ(DE3) endA Hte [argU proL

Camr] [argU ileY leuW Strep/Spec

r]

规格及成分 成分 编号 包装

本产品 140378 0.1 mL×10

使用手册 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。 自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

使用方法 1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL，可以根据实际情况分装使用。

以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量的 DNA，通常 100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。

3. 42℃热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养 12-16 小时。

注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。

5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。