大肠杆菌DB3.1化学感受态细胞

产品及特点本产品是采用大肠杆菌 DB3.1 细胞含有 gyrA462 基因，对λ噬菌体的 ccdB 基因 产物的毒性具有抵抗作用，特别适合用于转化和扩增包含 ccdB 基因的质粒载体。

1. 使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 107，-80℃保存几个月转化效率不发生改 变。

2. DB3.1 感受态细胞具有链霉素抗性。

3. DB3.1 菌株基因型： F- gyrA 462endA1 Δ(sr1-recA) mcrB mrr hsdS20(rB-,mB-) supE44 Ara-14 galK2 lac Y1 proA2 rpsL20(SmR) xy1-5 λ- leu mtl1

4. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。
规格及成分成分 编号 小扁盒包装
本产品 140218 0.1mL×10
使用手册 140218sc 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。 

使用方法

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根 据实际情况分装使用。 以下实验以 100 μl 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适 量的 DNA，通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用 移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。

3. 42℃热击 90 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的 LB 固体琼脂 培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃直至液体被吸收， 倒置培养，37℃培养 12-16 小时。

注意：

1 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平 板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数 较少，可通过离心（4,000 rpm ，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布 于平板中。

2 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再 涂布新培养基进行培养。