Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶 - 核酸合成与提取 - 分子生物学 - 产品中心 - 上海钰博生物科技有限公司

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真核生物中mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟嘌呤帽结构（m7Gppp）连接到RNA的5'末端（m7Gppp5'N）。牛痘病毒加帽酶，在合适浓度的加帽缓冲液（Capping buffer），鸟苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在条件下，能够在一个小时之内对RNA进行加帽，并且保证正确的方向。

本品以无菌液体形式提供，可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA的5'末端标记反应。

产品性质

来源（Source）	携带牛痘病毒加帽酶基因的E. coli
最适温度（Optimum Temperature）	37℃
储存缓冲液（Storage Buffer）	20 mM Tris-HCl pH 8.0，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100，50%甘油
活性单位定义（Unit Definition）	37℃条件下，1小时内将10 pmol GTP（α-³²P）掺入到一条含80个核苷酸（80 nt）转录产物上所需要的酶量，即为1个单位。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编码/规格
组分编号	组分名称	10615ES76（500 U）	10615ES84（2000 U）	10615ES92（10000 U）
10615-A	10×Capping Buffer	150 μL	500 μL	1.25 mL×2
10615-B	Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL）	50 μL	200 μL	1 mL

运输和保存方法

冰袋运输，-20℃保存，有效期1年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；

2）所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬；

3）在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5'末端的二级结构；

4）对于已知5'末端结构的RNA，可以延长反应时间至60分钟，提高加帽效率；

5）5'末端标记反应体系中，GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。

使用方法

1. 加帽反应（反应体系20 μL）

本步骤适用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反应，且可根据实验需要放大。

1）取10 μg RNA至1.5 mL离心管，使用无核酸酶的水稀释至15 μL；

2）65℃加热5分钟；

3）取出离心管置于冰上5分钟；

4）依次加入以下组分：

组分	体积
上述变性的RNA	15 μL
10×Capping Buffer	2.0 μL
GTP（10 mM）	1.0 μL
SAM（2 mM）	1.0 μL
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL）	1.0 μL

【注】：10×Capping Buffer配方为：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0；50 mM KCl，10 mM MgCl₂，10 mM DTT。

5）37°C孵育30分钟；

6）RNA加帽完成，可进行后续实验。

2. 5'末端标记反应（反应体系20 μL）

本步骤适用于5'末端带有三磷酸的RNA标记，且可根据实验需要放大，其标记效率受反应体系中RNA与GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。

1）取适量RNA到1.5 mL离心管，使用无核酸酶的水稀释至14 μL；

2）65℃加热5分钟；

3）取出离心管置于冰上5分钟；

4）依次加入以下组分：

组分	体积
上述变性的RNA	14.0 μL
10×Capping Buffer	2.0 μL
GTP mix	2.0 μL
SAM（2 mM）	1.0 μL
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL）	1.0 μL

【注】：GTP mix为GTP和少量标记物，其中GTP使用浓度参照注意事项5）。

5）37°C孵育30分钟；

6）RNA 5'末端标记完成，可进行后续实验。

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产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶	YB037K	500 U	1256.00
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶	YB037K	2000 U	3856.00
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶	YB037K	10000 U	14856.00

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