SYBR Green I (10,000× in DMSO) 核酸凝胶染料

产品信息

产品描述

SYBR Green I，一种灵敏度非常高的dsDNA荧光染料，常用于核酸琼脂糖凝胶/聚丙烯酰胺凝胶电泳。SYBR Green I染料的最大激发波长为497 nm，但是在～290 nm和～380 nm处有二级激发峰。与DNA结合的SYBR Green I染料的荧光发射集中在520 nm。因此，该染料可适用于多种凝胶检测仪。
本品是溶于DMSO的SYBR Green I 10,000×染液。

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃避光保存，有效期1年。

注意事项

1）独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Green I 的致突变性明显比溴化乙锭要低得多，目前尚无关于SYBR Green I 染料对人体的致突变性或毒性的数据，但我们必须提醒用户注意，该染料能与DNA结合，因此，它应当被看作潜在诱变剂，在使用前小心谨慎。另外，在处理DMSO储存液时应特别小心，因为DMSO能促进有机分子进入组织。染料的处理应当符合当地的规定。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【开始使用前】

使用前将本品取出并回温至室温，使DMSO彻底解冻、溶液均一。于离心机上短暂离心确保所有溶液至管底。第一次使用时可将本品分装成多个小份后冻存，小份染料将更快速熔解。

一、 染色

1. 电泳后DNA染色

1）在琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。

【注】：TBE和TAE缓冲液均适合于SYBR Green I染料。

2）用TE、TAE或TBE将SYBR Green I进行10000倍稀释。
注：

① SYBR Green I染色对pH敏感，为获得最佳的灵敏度，应确认在染色温度下染色液的pH值在7.5-8.0之间（pH8.0更佳）。

② 用水配制的染色液不如用缓冲液配制的稳定，为得到较好灵敏度，必须在24 h内使用。

3）染液要充分覆盖凝胶，室温轻摇孵育10-40 min。

注：

① 推荐用塑料而不是玻璃容器来储存染色液，应为染料会吸附到玻璃表面。

② 染色过程避光进行，建议在容器上加盖铝箔或置于暗处。

③ 凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同，染色时间将有所不同。

④ 无需脱色。

⑤ 染液可置暗处（最好是冷藏）放置至少1周，重复使用最多4次。

2. 电泳前DNA染色

1）一般选择配制成SYBR Green I预制凝胶来实验。

临灌胶前将SYBR Green I储存液按照1：10000倍稀释到凝胶溶液中，预制成含有SYBR Green I染料的琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶。预制的SYBR Green I凝胶的DNA检测下限（大约为30-40 pg/条带），略高于电泳后染色（＜20 pg/条带）。此外，在SYBR Green I凝胶中的DNA片段迁移率明显比无染料凝胶中的相同片段慢。

2）作为DNA模板预染标记。
一般而言，DNA在电泳前与染料工作液至少孵育15 min。

二、 凝胶成像（紫外或蓝光透射仪或紫外顶置光源直射）
可在紫外或蓝光光源下轻松观察到用SYBR Green I染色的DNA。

三、从双链DNA中去除SYBR Green I

将SYBR Green I染色的DNA移至100 mM NaCl中，加入2.5倍体积的无水或95%的乙醇。在冰上孵育约20 min，在4℃离心至少10 min。去除乙醇，并用70%乙醇洗涤沉淀。让乙醇挥发，用TE重悬双链DNA即可。