Hieff Trans™ Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent Hieff Trans™悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂

产品信息

产品描述

Hieff TransTM悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂是一种阳离子脂质体转染试剂，经优化专门用于悬浮细胞的转染，且适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。

Hieff TransTM悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂以无菌的液体形式提供。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品4ºC保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1. 为得到最优的转染效率，请先用无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释Hieff TransTM Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent（以下简称Hieff TransTM），之后与DNA或RNA做混合。
2. 使用高质量的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，务必确保质粒的高纯度和无菌状态，彻底去除质粒提取过程中可能残留的苯酚和高盐，因为上述酚类会对细胞造成损失，而高盐分会干扰“Hieff TransTM-复合物”的形成。质粒中的内毒素也是转染的大敌，务必去除。

3. 转染时培养基中不能添加抗生素。

4. 阳离子脂质体应该在4℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。

5. 需优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA和Hieff TransTM的比例，通常推荐是1:2 或1:3。

推荐转染条件（以293悬浮培养细胞，质粒DNA转染为例）

最终转染体积：30 mL

转染细胞数目：3×107 cell（最终细胞密度：1×106  cell/mL），转染之前需要确保细胞健康，细胞活力>90%。

质粒DNA量：20–40 μg (typically use 30 μg)

转染试剂量：40–80 μL (typically use 60 μL). Use 2 μL Hieff TransTM per 1 μg of plasmid DNA transfected.

操作步骤（293悬浮细胞）

使用以下步骤在30 mL总体系内转染293细胞，转染过程中生长培养基内不要添加抗生素，否则会降低转染效率。转染过程请同时设置阳性对照组和阴性对照组（无DNA，无Hieff TransTM）。

注：对于其他的培养总体系，按比例放大或者缩小各组分用量。
1. 转染当天，在配制复合物之前，准备转染需要的细胞量【见上推荐转染条件，即28 mL 生长培养基内加入3×107 cell，台盼蓝排斥法确定细胞活力和小量细胞成团量。剧烈漩涡混匀45 s以打破细胞团，并用计数器测定总细胞量。细胞活力需>90%。】 
注：为了达到最优效率，确保单细胞悬液。

2. 按照以下方法配制Hieff TransTM-DNA复合物，
a, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释30 μg质粒DNA，使其终体积为1 mL；
b, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释60 μL Hieff TransTM，使其终体积为1 mL；轻轻混匀，于室温孵育5 min；
注意：过长时间孵育会降低效率。
c, 孵育5min之后，将稀释的质粒DNA加入稀释的Hieff TransTM，使其总体积为2mL。轻轻混匀。
d, 室温孵育20-30 min，使得DNA-Hieff TransTM复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
注意：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5 h。
3. 孵育完全后，将2mL DNA-Hieff TransTM复合物加入28mL 含293悬浮细胞的生长培养基内，使得细胞最终的密度约为1×106 cell/mL。对于阴性对照，用2mL无血清培养基（如OPTI-MEM I）替换。
4. 37℃，8% CO2轨道摇床培养，转速125 rpm，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，可能有必要在4-6 h后更换生长培养基，不会降低转染活性。