Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒

产品信息

产品描述

细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicative senescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性，但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。

本试剂盒正是基于SA -β-gal活性变化的生物学特征而设计的，以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。

本试剂盒可以培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感，特异性高。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。

产品组分

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本试剂盒β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意小心防护。
3）细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值，不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
4）40754-B刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解，之后才能用于染色实验。配置染色工作液时，也可能有少量絮状沉淀出现，震荡混匀后就会完全溶解。在染色前一定要确保所有的试剂处于完全溶解状态。

5）X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在4ºC冰箱保存，但也需避免光照。

使用方法

1. 实验前的准备工作：

1）染色工作液配制

实验开始前，将试剂盒内各组分从冰箱内取出，彻底溶解。其中X-Gal溶液最好置入冰槽里等待溶化。根据表1进行染色工作液的配置，实验体系类型，检测样本数，统一配制单次实验需要的染色工作液总量。
表1 染色工作液配方表

注：配制染色工作液时需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，对于二者的判定：聚丙烯容器可高压灭菌，而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行，如细胞培养常用的6孔板。

2. 6孔细胞培养板染色（贴壁细胞）：

1）吸除细胞培养液，用PBS/HBSS洗涤细胞1次，加入1mLβ-半乳糖苷酶染色固定液。室温固定15min。
注：对于其它类型的培养板，固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。

2）吸除固定液，用PBS/HBSS洗涤细胞3次，每次3min。

3）吸除PBS/HBSS，每孔加入1mL预热的染色工作液，覆盖整个生长表面。

4）37℃孵育过夜，可以用封口膜或保鲜膜封住6孔板防止液体蒸发。
注：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
5）普通光学显微镜下观察和计数：表达SA β-gal的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2mL PBS缓冲液，4℃可以保存数天，或者加入封片剂封片后，4℃可保存较长时间。

3. 悬浮细胞染色：
1）离心收集细胞至1.5mL离心管内，用PBS/HBSS洗涤1次，加入1mLβ-半乳糖苷酶染色固定液。室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。

2）离心，吸除细胞固定液，用PBS/HBSS洗涤细胞3次，每次3min。

3）离心，吸除PBS/HBSS，每管加入0.5-1mL预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。

4）37℃孵育过夜。
注：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
5）取部分染色好的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，加入1mL PBS缓冲液，4℃可以保存数天。也可取细胞用于涂片，加上封片剂封片后，4℃可保存较长时间。

4. 组织切片染色：

1）对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行；

2）加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15min。

3）用PBS浸泡洗涤组织3次，每次不少于5min；

4）吸除PBS，加入适当量的预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。

5）37℃孵育过夜，可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发，最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
注：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。

6）普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数，加上封片剂封片后4℃可保存较长时间。