DiA细胞膜荧光探针探针针

产品信息

产品描述

DiA是一种亲脂性的荧光染料，可以用来染色细胞膜和其它脂溶性生物结构。DiA不溶于水，当它与细胞膜结合，其荧光强度会显著增强。一旦应用于细胞中，这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。

DiA可与DiI联合使用进行神经元细胞的双色标记。研究发现，某些情况下当DiO不能标记固定组织时，DiA可得到良好的标记效果。DiA与磷脂双层膜结合后，光谱迁移明显加强。正由于其发射光谱非常广，在适当的滤光片下，可以绿色、橙色甚至红色荧光被检测到。DiA产品的光谱学相关参数为Ex=491nm，Em=613nm。

产品性质

运输与保存方法

室温运输。产品-20ºC干燥避光保存，有效期一年。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色液制备

（1）配置DMSO储存液：储存液用DMSO配置浓度1～5 mM。
【注】：a、未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，可稳定保存6个月。

       b、必须保证所用溶剂新鲜无水。

（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
【注】：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。

2. 悬浮细胞染色

（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
（2）37 ℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

（3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。

（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

（5）重复（3），（4）步骤两次以上。

3. 贴壁细胞的染色

（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

（3）在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37 ℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。

4. 显微镜检测

（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。

（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005