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Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒
产品信息
产品名称 |
货号 |
规格 |
价格(元) |
促销价(元) |
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 |
YB126X |
20 T |
480.00 |
366.00 |
YB126X |
50 T |
960.00 |
686.00 |
|
YB126X |
100 T |
1680.00 |
986.00 |
产品描述
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒是用FITC标记的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生。
其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36 kDa的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合,可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
另外,本试剂盒中还提供了碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。
本试剂盒可用于流式细胞仪、荧光显微镜进行检测。
产品组分
编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
||
40302ES60(100T) |
||||
40302-A |
100 μL |
500 μL |
||
40302-B |
200 μL |
1 mL |
||
40302-C |
1×Binding Buffer |
10 mL |
50 mL |
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。-20 ℃避光长期保存,避免反复冻融,一年有效。
【注】:如果需要在短时间内多次重复使用,可以在4 ℃避光保存,半年有效。
注意事项
1)由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤;PI摄入过多,消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇使胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用Binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4)如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5)试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
操作方法
1.1 样品染色
1)悬浮细胞:300 g,4℃离心5 min收集细胞。
贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300 g,4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。
2)用预冷的PBS洗涤细胞2次,每次均需300 g,4℃离心5 min。收集1~5×105细胞。
3)吸弃PBS,加入100 μL 1×Binding Buffer重悬细胞。
4)加入5 μL Annexin V-FITC和10 μLPI Staining Solution,轻轻混匀。
5)避光、室温反应10-15 min。
6)加入400 μL 1×Binding Buffer,混匀后放置于冰上,样品在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
【注】:为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。
1.2 样品分析
A.流式细胞仪分析:
FITC最大激发波长为488 nm,最大发射波长525 nm,FITC的绿色荧光在FL1通道检测;PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为615 nm,PI的红色荧光在FL2或FL3通道检测。用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。典型的实验中,细胞可以分成三个亚群,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色荧光双重染色。
B.荧光显微镜分析:
1)滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞。
【注】:对于贴壁细胞,可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。
2)在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。
数据展示
数据来源:上海交通大学纳米生物工程研究所;
文章信息:Cui, D., et al., Regression of Gastric Cancer by Systemic Injection of RNA Nanoparticles Carrying both Ligand and siRNA. Sci Rep, 2015. 5: p. 10726.
细胞类型:MGC803 cells;
所用试剂:Yeasen,Cat:40302,Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 。
“Fig5.Determination of cell death by flow cytometry of Annexin V-FITC/PI staining in MGC803 cells transfected with 25 nM FA-pRNA-3WJ-BRCAA1siRNA or FA-pRNA-3WJ-Scram-siRNA for 48 h.”
数据来源:中山大学;
文章信息:Zhou, T., et al., Mild hypothermia protects against oxygen glucose deprivation/reoxygenation-induced apoptosis via the Wnt/beta-catenin signaling pathway in hippocampal neurons. Biochem Biophys Res Commun, 2017. 486(4): p. 1005-1013.
细胞类型:Hippocampal neurons;
所用试剂:Yeasen,Cat:40302 ,Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit。
“Fig. 3. Wnt/b-catenin mediates the expression levels of apoptosis-related proteins and the protective effects of mild hypothermia against OGD/R-induced apoptosis。scatter diagram of PI/Annexin V gating from different groups. a. Control; b.OGD/R; c.OGD/R t MH(24 h); d.OGD/R t MH(24 h)tDkk1; e. OGD/R t Dkk1.”
部门 |
姓名 | 手机 | |||
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