Trypsin 1:250 (powder) 胰蛋白酶1:250（粉末）

产品信息

产品描述

胰蛋白酶（Trypsin）是一种普遍发现于脊椎动物消化系统的丝氨酸蛋白酶，能水解蛋白，以无活性的胰蛋白酶原（trypsinogen）的形式分泌于胰腺中。其切割肽链的位点主要位于赖氨酸或精氨酸的羧基端（二者紧接脯氨酸的情况除外）。胰蛋白酶包括两个亚基，α亚基（有2个多肽链构成）和β亚基（有1个多肽链构成）。其水解活性可被多种抑制剂抑制，包括：1）有机磷化合物，如氟磷酸异丙酯；2）来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂；3）银离子；4）特定蛋白酶抑制剂，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、DFP、亮抑肽酶、PMSF、TLCK等；

本品是来源于猪胰腺的胰蛋白酶冻干粉，经γ射线处理灭活病毒，酶活力> 250 units/mg。广泛用于细胞传代，将贴壁细胞从培养板上消化水解下来制备单细胞悬液，常用的工作浓度是0.25-5%（w/v）。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。冻干粉4℃保存，保持干燥。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）胰蛋白冻干粉产品常遇到的活性定义及其转换，

1 BAEE U：在25℃，pH 7.6 的条件下，以BAEE为底物，3.2 mL的反应体系中，A253吸光值每分钟会发生0.001的变化即为一个胰蛋白酶酶活单位。

1 TAME U：在25℃，pH 8.2，0.001M的Ca²⁺的条件下，每分钟水解 1微摩尔TAME 的样品量。

1 USP U：在指定条件下，每分钟引起吸光值发生0.003的变化的样品活性。

1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit

使用方法（用于贴壁细胞的消化）

1. 胰酶浓缩液（2.5%）的配置

称取2.5 g胰酶粉末溶于100 mL HBSS（无钙，镁）缓冲液，并调整pH在7.4-7.6范围。此时得到的即2.5%胰酶浓缩液，置于4℃短时间保存，3个月相对稳定。建议分装冻存，利于长期保存。解冻后可能会出现少量沉淀，属于正常现象，不会影响其使用效力。

【注】冻干粉也可溶于其他不含钙镁离子的平衡盐缓冲液如PBS。

细胞的消化可以直接用胰酶溶液，但通常使用的是胰酶-EDTA溶液，因为EDTA是一种II价金属离子螯合剂，能够螯合钙镁离子，减少细胞间的粘附性，从而增强胰酶的活性。

2. 胰酶-EDTA溶液的配制：

3. 贴壁细胞的消化

方法一

1）移除培养板中的培养液，用不含Ca²⁺、Mg²⁺的缓冲液清洗单层贴壁细胞，直至清除残余血清，吸除盐溶液。

2）向上述贴壁细胞中加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液，至完全覆盖细胞即可。

3）倾斜培养板，吸取胰酶-EDTA溶液，反复吹洗细胞数次，注意消化时间不可过长。

【注】消化时间跟细胞类型、细胞密度、所用血清浓度、胰酶活性、以及消化前细胞培养时间有关。

4）将细胞于室温孵育直至细胞分离，期间可将细胞培养板置于显微镜下观察，避免细胞过度消化，从而避免胰酶对细胞造成的损伤。

5）加入10 mL细胞培养液，轻轻反复吹吸从而将细胞从培养板底尽可能吹离，吹洗时尽量避免气泡的产生。

6）进行下一步操作或将细胞冻存。

【注】操作时务必小心谨慎，同时时刻注意避免交叉污染发生的可能性。

方法二

以25cm² T-Flask为例，

1）无菌条件下吸除培养瓶中培养液。

2）加入3 mL冰的胰蛋白酶-EDTA溶液（配方同上）。

3）孵育30 s（或更长，如果需要）。置于低倍镜观察，如果有部分细胞开始变圆脱离培养瓶壁，此时可吸除胰酶溶液，继续孵育至细胞完全脱落。

4）加入10 mL新鲜MEM培养液，可用枪快速的将培养液加入，有助于使细胞脱落；然后使用相同的枪头，轻轻地多次吹洗细胞并混匀后，吸取其中5 mL于一个新的培养瓶中。

5）置培养条件下孵育。