Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾胶原蛋白I

产品信息

产品描述

胶原蛋白（Collagen）是结缔组织和内脏器官外基质的主要成分，但在皮肤、肌腱、骨骼中分布最为广泛。胶原蛋白在结构和遗传学上被分为不同类型，I型胶原蛋白（Collagen, Type I）结构上是由2个α1链和1个α2链组成300nm长的异源多聚体。当用作凝胶时，胶原蛋白有助于体外培养并增强细胞特异性形态和功能的表达。胶原蛋白也可用于薄层以促进附着，应用包括研究肿瘤细胞侵袭和迁移，单核细胞，巨噬细胞的培养或分化研究，以及粒细胞和巨噬细胞的放射自显影研究。胶原I还用于维持肝细胞功能，分化状态和肝细胞基因转录水平的升高等研究。

本品是来源与鼠尾，溶于0.02M HAc溶液，浓度为3~4mg/mL，通过SDS-PAGE测定纯度大于90 %，无菌。

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期1年。不可冻存。

注意事项

1） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2） 整个操作请于冰上进行，因室温下胶原蛋白I可迅速成胶。

3） 整个操作请在无菌环境下无菌操作，避免污染以影响细胞生长。

使用说明

胶原蛋白I可凝胶到盖玻片或组织培养皿上或用作细胞附着的薄膜涂层。细胞可在凝胶顶部，凝胶内或凝胶层之间培养。

薄层包被（Thin coating）程序：

【注意】：包被浓度为5-10µg/cm²，推荐浓度可首选5µg/cm²。建议根据具体的细胞培养系统进行优化。

1）胶原蛋白I用0.02M乙酸稀释配置50μg/mL工作液，胶原蛋白I不溶于中性pH溶液。

2）以5µg/cm²涂布培养皿，例如：一个35mm的培养皿的表面积约为10cm²，1~2mL的工作液足以覆盖此皿。

3）室温孵育1小时。

4）小心吸取剩余溶液，用PBS或无血清培养基洗涤以除去多余乙酸。

5）组织培养皿包被后可立即使用，也可风干，在2-8℃无菌条件下可贮存长达一周。

胶凝程序：

胶原蛋白I按以下步骤使其pH达到碱性时凝胶

1）将无菌5cm左右的纱布海绵贴在150mm培养皿的盖子上来制备氨蒸气室。用氢氧化铵使纱布饱和，把盖子放在150mm的培养皿上，暂放置一边。

2）将胶原蛋白I均匀涂布在要包被物的表面上，厚度可以根据需要改变，胶原蛋白I（50-100μL）足以涂覆22mm的盖玻片。 对于直径100mm的培养皿，每个加入约6mL; 对于60mm培养皿添加约2.3mL，对于35mm培养皿添加约1mL。

3）将涂有胶原蛋白的盖玻片或带有盖子的培养皿转移到氨蒸气室并暴露三分钟。

4）在无菌蒸馏水中（35mm培养皿加5mL，60mm培养皿加10mL等）浸泡涂布的盖玻片或培养皿30min。吸取原蒸馏水并加0.5-1.0mL无菌蒸馏水，放置在层流罩中过夜。

5）吸出蒸馏水，用含血清的平衡盐缓冲液溶液代替并保存在2-8°C。

备用胶凝程序：

1）在冰上放置以下物品：胶原蛋白I、无菌10×PBS、无菌蒸馏水、无菌1M NaOH

2）确定胶原蛋白I待使用溶液所需的最终浓度的体积。

3）在冰上放置无菌管以收存胶原蛋白I。

4）在无菌条件下执行以下步骤。

4.1加入10×PBS（终体积/10）mL

4.2计算要使用的胶原蛋白I的体积（不要添加到管中直到步骤4.6为止）

终体积x终胶原蛋白I浓度（mg/mL）

_________________________        = 要加入的胶原蛋白量

瓶标签上具体浓度（见具体批号）

4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的胶原体积×0.023）mL的无菌冰冷1M NaOH

4.4向4.3溶液中加入下述体积的无菌冰冷蒸馏水：

添加蒸馏水体积=V（终）—V（胶原蛋白）—V(10× PBS）—V（1M NaOH）

4.5混合管中的物质并放入冰中。

4.6加入胶原蛋白I并计算体积，混匀，冰上备用。

5）胶原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小时。

6）使用时，无菌条件下将溶液加入到细胞培养装置中37°C凝胶30min。