本试剂盒采用竞争ELISA法。用PIINP抗原包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的PIINP与包被的PIINP竞争生物素标记的抗PIINP单抗上的结合位点，游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变为黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，PIINP浓度与OD450值之间呈反比，通过绘制标准曲线计算出样品中PIINP的浓度。

1.实验前标准品、试剂及样本的准备；

2.加样（标准品及样本）100μL，37℃孵育2小时；

3.吸弃，加检测溶液A100μL，37℃孵育1小时；

4.洗板3次；

5.加检测溶液B100μL，37℃孵育1小时；

6.洗板5次；

7.加TMB底物90μL，37℃孵育15－25分钟；

8.加终止液50μL，立即450nm读数。