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Taq DNA聚合酶,5U/uL
Taq DNA聚合酶,5U/uL
Product Introduction

Taq DNA聚合酶,5U/uL

名称 编号 规格 价格 手册
Taq DNA聚合酶,5U/uL YB-004H 500 U 50元  

英文名称:

运输:低温

保存:负35度

有效期:1年

货期:1-3天

其他:

产品介绍:

用于PCR

产品及特点 本产品是 Thermus aquaticus(水生栖热菌)的 DNA 聚合酶基因在 E.coli 中表达而得,具有以双链 DNA 为模板的 5'→3'聚合酶活性和 5'→3'外切酶活性。Taq DNA 聚合酶长为 832 个氨基酸,分子量为 94 Kd。该酶可以广泛用于 PCR,RT-PCR,加尾反应等。

1. 耐热 DNA 聚合活性,该酶在 90℃以上几乎无 DNA 合成,在 75~80℃时延伸率约 150 个核苷酸,70℃时为 60 个核苷酸/秒,55℃时为 24 个核苷酸/秒。在 65~68℃并有 Mn2+存在时还具有逆转录活性。

2. 热稳定,在 PCR 混合物中 95℃保温 40 分钟仍可保持 50%的活性。

3. Mg2+离子依赖性,MgCl2浓度在 2.0 mM 时该酶催化活性最高。

4. 本酶无 3'→5'外切活性,不具 3'→5'校对功能,碱基错配机率为 2.1×10-4。

规格及成分 成 份 编 号 500 U 包装(51206-500)

5000 U 包装(51206-5000)

Taq DNA 聚合酶(5 U/μL)

51206A 100 uL(红盖) 1 mL(红盖)

10×PCR Buffer(含 Mg2+)

51206B 1 mL(绿盖) 10 mL(瓶)

MgCl2,25 mM 51206C 1 mL(黄盖) 1 mL(黄盖)

使用手册 51206sc 1 份 1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法 以λ DNA 为模板进行 PCR 扩增反应为例

1.按下列组份配制 PCR 反应液。

Taq DNA 聚合酶(5U/ uL) 0.25 uL

10×PCR Buffer(含 Mg2+) 5 uL

MgCl2

(25 mM) 根据需要补加

自备 dNTP(各 2.5 mM) 4 uL

模板 DNA 见下

引物 1(20 uM) 1 uL

引物 2(20 uM) 1 uL

灭菌蒸馏水 Up to 50 uL

注:10×PCR Buffer 含 15 mM MgCl2

(在 PCR 体系中的终浓度为

1.5 mM),是否需要补加 MgCl2 根据实验决定。但一般不需要补加。

推荐 50 uL PCR 反应体系中模板 DNA 推荐使用量

哺乳动物基因组 DNA 0.5-1 ug

酵母基因组 DNA 5-500 ng

细菌基因组 DNA 0.5-50 ng

质粒 DNA 5-500 pg

PCR 回收片段 1-100 pg

2.PCR 反应条件

以λDNA 为模板,扩增 1 kbp 的 DNA 片段的 PCR 反应条件如下:

94℃ 30 sec.

55℃ 30 sec. 30-35cycles

72℃ 1 min.

注:PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项

PCR 的反应液请在冰中配制,然后置于 PCR 反应仪上进行 PCR 反应。这种冷启动法(Cool Start Method)可增强 PCR 扩增的特异性,减少 PCR 过程中的非特异性反应,能得到良好的 PCR 结果。




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