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销售:18321282235
技术:021-60514606
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Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ，Set 2（96 种）
产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
|
Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set1 |
YB027G |
96×2 T |
2753.00 |
|
Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set2 |
YB027G |
96×2 T |
2753.00 |
产品描述
Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®是Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer。 2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer，配合Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®（Cat#12201）使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
产品组分
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编号 |
名称 |
规格 |
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12613ES02 |
PE Adapter |
2×336 μL |
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i5 Index Primer 1-8 |
60 μL each |
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i7 Index Primer 1-12 |
40 μL each |
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12614ES02 |
PE Adapter |
2×336 μL |
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i5 Index Primer 9-16 |
60 μL each |
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|
i7 Index Primer 13-24 |
40 μL each |
运输与保存方法
冰袋运输。
所有组分-20°C保存，有效期1年。
注意事项
1）本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。
2）本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。
3）本试剂盒每个Set包含8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer，可以构建96种不同组合的双端Index标记文库，每个Set可构建192个DNA文库。2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer。您可以使用Cat#12613中的i5 Index Primer（或i7 Index Primer）与Cat#12614中的i7 Index Primer（或i5 Index Primer）组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。
4）切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。
5）使用Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下：
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina® 试剂盒操作说明进行。
接头连接（Adapter Ligation）：
在末端修复产物两端连接特定的Illumina®接头，即Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步骤3.2。
1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量；
表1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度
|
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
推荐Adapter(15 μM)使用量 |
|
400 ng |
30:1 |
3.5 μL |
|
300 ng |
40:1 |
3.5 μL |
|
200 ng |
60:1 |
3.5 μL |
|
100 ng |
100:1 |
3.0 μL |
|
50 ng |
100:1 |
1.5 μL |
【注】：Input DNA 摩尔数（pmol）≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度（bp）]
2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；
3. 配制表2所示反应体系；
表2. Adapter Ligation反应体系
|
名称 |
体积（μL） |
|
dA-tailed DNA |
60 |
|
Ligation Enhancer |
30* |
|
Quick T4 DNA Ligase |
5 |
|
PE Adapter |
x** |
|
ddH2O |
5-x |
【注】：*Ligation Enhancer比较粘稠，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。
**本公司接头浓度（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）与常规商业化试剂盒一致，皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示，计算接头用量。
4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；
5. 将PCR管置于PCR仪中，设置表3所示反应程序，进行接头连接反应：
表3. Adapter Ligation反应程序
|
温度 |
时间 |
|
热盖 |
Off |
|
20°C |
15 min |
|
4°C |
Hold |
【注】：当Input DNA量较低，实验效果不理想时，可尝试将连接时间延长一倍。
连接产物磁珠纯化（Post Ligation Clean Up）
该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物，分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要，详细操作步骤参照Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®建库试剂盒说明书。
文库扩增（Library Amplification）
该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集，使用本试剂盒接头时，该步骤为必做步骤；
1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；
2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系；
表4. PCR扩增反应体系
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名称 |
体积（μL） |
|
2× Super Canace®ⅡHigh-Fidelity Mix |
25 |
|
i5 Index Primer |
2.5 |
|
i7 Index Primer |
2.5 |
|
Adapter Ligated DNA |
20 |
【注】：文库扩增引物来自钰博生物接头引物试剂盒（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）。
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；
4. 将PCR管置于PCR仪中，设置表5所示反应程序，进行PCR扩增。
表5. PCR扩增反应程序
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温度 |
时间 |
循环数 |
|
98°C |
1 min |
1 |
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98°C |
10 sec |
根据实验需要调整 |
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60°C |
30 sec |
|
|
72°C |
30 sec |
|
|
72°C |
5 min |
1 |
|
4°C |
Hold |
- |
序列信息
PE Adapter for Illumina：
5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´
5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3´
i5 Index Primer for Illumina：
5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5 Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´
i7 Index Primer for Illumina：
5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7 Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´
[i5 Index]表示8 bp 的i5 Index序列，[i7 Index]表示8 bp 的i7 Index序列，各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示：
|
i5 Index Primers名称 |
引物中Index序列 |
测序对应Index序列 |
|
i5 index Primer1 |
CTCTCTAT |
CTCTCTAT |
|
i5 index Primer2 |
TATCCTCT |
TATCCTCT |
|
i5 index Primer3 |
GTAAGGAG |
GTAAGGAG |
|
i5 index Primer4 |
ACTGCATA |
ACTGCATA |
|
i5 index Primer5 |
AAGGAGTA |
AAGGAGTA |
|
i5 index Primer6 |
CTAAGCCT |
CTAAGCCT |
|
i5 index Primer7 |
CGTCTAAT |
CGTCTAAT |
|
i5 index Primer8 |
TCTCTCCG |
TCTCTCCG |
|
i5 index Primer9 |
TCGACTAG |
TCGACTAG |
|
i5 index Primer10 |
TTCTAGCT |
TTCTAGCT |
|
i5 index Primer11 |
CCTAGAGT |
CCTAGAGT |
|
i5 index Primer12 |
GCGTAAGA |
GCGTAAGA |
|
i5 index Primer13 |
CTATTAAG |
CTATTAAG |
|
i5 index Primer14 |
AAGGCTAT |
AAGGCTAT |
|
i5 index Primer15 |
GAGCCTTA |
GAGCCTTA |
|
i5 index Primer16 |
TTATGCGA |
TTATGCGA |
|
i7 Index Primer名称 |
引物Index序列 |
测序对应Index序列 |
|
i7 index Primer1 |
TCGCCTTA |
TAAGGCGA |
|
i7 index Primer2 |
CTAGTACG |
CGTACTAG |
|
i7 index Primer3 |
TTCTGCCT |
AGGCAGAA |
|
i7 index Primer4 |
GCTCAGGA |
TCCTGAGC |
|
i7 index Primer5 |
AGGAGTCC |
GGACTCCT |
|
i7 index Primer6 |
CATGCCTA |
TAGGCATG |
|
i7 index Primer7 |
GTAGAGAG |
CTCTCTAC |
|
i7 index Primer8 |
CAGCCTCG |
CGAGGCTG |
|
i7 index Primer9 |
TGCCTCTT |
AAGAGGCA |
|
i7 index Primer10 |
TCCTCTAC |
GTAGAGGA |
|
i7 index Primer11 |
TCATGAGC |
GCTCATGA |
|
i7 index Primer12 |
CCTGAGAT |
ATCTCAGG |
|
i7 index Primer13 |
TAGCGAGT |
ACTCGCTA |
|
i7 index Primer14 |
GTAGCTCC |
GGAGCTAC |
|
i7 index Primer15 |
TACTACGC |
GCGTAGTA |
|
i7 index Primer16 |
AGGCTCCG |
CGGAGCCT |
|
i7 index Primer17 |
GCAGCGTA |
TACGCTGC |
|
i7 index Primer18 |
CTGCGCAT |
ATGCGCAG |
|
i7 index Primer19 |
GAGCGCTA |
TAGCGCTC |
|
i7 index Primer20 |
CGCTCAGT |
ACTGAGCG |
|
i7 index Primer21 |
GTCTTAGG |
CCTAAGAC |
|
i7 index Primer22 |
ACTGATCG |
CGATCAGT |
|
i7 index Primer23 |
TAGCTGCA |
TGCAGCTA |
|
i7 index Primer24 |
GACGTCGA |
TCGACGTC |
Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set1(Cat#12613)引物组合方案
|
i7 Idx i5 Idx |
P701 |
P702 |
P703 |
P704 |
P705 |
P706 |
P707 |
P708 |
P709 |
P710 |
P711 |
P712 |
|
P501 |
P501 P701 |
P501 P702 |
P501 P703 |
P501 P704 |
P501 P705 |
P501 P706 |
P501 P707 |
P501 P708 |
P501 P709 |
P501 P710 |
P501 P711 |
P501 P712 |
|
P502 |
P502 P701 |
P502 P702 |
P502 P703 |
P502 P704 |
P502 P705 |
P502 P706 |
P502 P707 |
P502 P708 |
P502 P709 |
P502 P710 |
P502 P711 |
P502 P712 |
|
P503 |
P503 P701 |
P503 P702 |
P503 P703 |
P503 P704 |
P503 P705 |
P503 P706 |
P503 P707 |
P503 P708 |
P503 P709 |
P503 P710 |
P503 P711 |
P503 P712 |
|
P504 |
P504 P701 |
P504 P702 |
P504 P703 |
P504 P704 |
P504 P705 |
P504 P706 |
P504 P707 |
P504 P708 |
P504 P709 |
P504 P710 |
P504 P711 |
P504 P712 |
|
P505 |
P505 P701 |
P505 P702 |
P505 P703 |
P505 P704 |
P505 P705 |
P505 P706 |
P505 P707 |
P505 P708 |
P505 P709 |
P505 P710 |
P505 P711 |
P505 P712 |
|
P506 |
P506 P701 |
P506 P702 |
P506 P703 |
P506 P704 |
P506 P705 |
P506 P706 |
P506 P707 |
P506 P708 |
P506 P709 |
P506 P710 |
P506 P711 |
P506 P712 |
|
P507 |
P507 P701 |
P507 P702 |
P507 P703 |
P507 P704 |
P507 P705 |
P507 P706 |
P507 P707 |
P507 P708 |
P507 P709 |
P507 P710 |
P507 P711 |
P507 P712 |
|
P508 |
P508 P701 |
P508 P702 |
P508 P703 |
P508 P704 |
P508 P705 |
P508 P706 |
P508 P707 |
P508 P708 |
P508 P709 |
P508 P710 |
P508 P711 |
P508 P712 |
Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® Set2(Cat#12614)引物组合方案
|
i7 Idx i5 Idx |
P713 |
P714 |
P715 |
P716 |
P717 |
P718 |
P719 |
P720 |
P721 |
P722 |
P723 |
P724 |
|
P509 |
P509 P713 |
P509 P714 |
P509 P715 |
P509 P716 |
P509 P717 |
P509 P718 |
P509 P719 |
P509 P720 |
P509 P721 |
P509 P722 |
P509 P723 |
P509 P724 |
|
P510 |
P510 P713 |
P510 P714 |
P510 P715 |
P510 P716 |
P510 P717 |
P510 P718 |
P510 P719 |
P510 P720 |
P510 P721 |
P510 P722 |
P510 P723 |
P510 P724 |
|
P511 |
P511 P713 |
P511 P714 |
P511 P715 |
P511 P716 |
P511 P717 |
P511 P718 |
P511 P719 |
P511 P720 |
P511 P721 |
P511 P722 |
P510 P723 |
P511 P724 |
|
P512 |
P512 P713 |
P512 P714 |
P512 P715 |
P512 P716 |
P512 P717 |
P512 P718 |
P512 P719 |
P512 P720 |
P512 P721 |
P512 P722 |
P512 P723 |
P512 P724 |
|
P513 |
P513 P713 |
P513 P714 |
P513 P715 |
P513 P716 |
P513 P717 |
P513 P718 |
P513 P719 |
P513 P720 |
P513 P721 |
P513 P722 |
P513 P723 |
P513 P724 |
|
P514 |
P514 P713 |
P514 P714 |
P514 P715 |
P514 P716 |
P514 P717 |
P514 P718 |
P514 P719 |
P514 P720 |
P514 P721 |
P514 P722 |
P514 P723 |
P514 P724 |
|
P515 |
P515 P713 |
P515 P714 |
P515 P715 |
P515 P716 |
P515 P717 |
P515 P718 |
P515 P719 |
P515 P720 |
P515 P721 |
P515 P722 |
P515 P723 |
P515 P724 |
|
P516 |
P516 P713 |
P516 P714 |
P516 P715 |
P516 P716 |
P516 P717 |
P516 P718 |
P516 P719 |
P516 P720 |
P516 P721 |
P516 P722 |
P516 P723 |
P516 P724 |
部门 |
姓名 | 手机 | |||
| 销售部 | 顾先生 | 1916510334@qq.com | 18321282235 | 1916510334 | |
| 技术部 | 技术支持 | 1781364813@qq.com | 13816899465 | 1781364813 |
全国免费电话：18321282235
销售: 18321282235
86-21-60514606
技术： 13816899465
传真: 021-37680378
- Hieff NGS® Ultima DNA Library Prep Kit for Illumina® 全能型DNA建库试剂盒...
- 2× Ultima HF Amplification Mix for MGI®...
- Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI® MGI®测序平台 Fast-Pace DNA 环化试剂盒...
- 2×Hieff® C1P6 High GC Multiplex PCR Master Mix 2×C1P6高GC多重PCR预混液...
- Hieff ® Smearase...
- DNA polymerase I DNA聚合酶I...
- T4 Polynucleotide Kinase T4 多聚核苷酸激酶...
- T4 DNA Polymerase T4 DNA聚合酶...
- 2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification...
- 2×Super Canace®Ⅱ Uracil High-Fidelity Mix for Library Amplification 2×Super Cana...
