Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA Polymerase

产品信息

产品描述

Hieff Canace^® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase是一种基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶，和Pfu DNA Polymerase相比，Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升，针对复杂的模板也能快速准确的完成PCR反应。其保真性是Taq DNA Polymerase的52倍，是Pfu DNA Polymerase的6倍，且完全克服了常规高保真酶无法以dUTP为原料进行聚合反应、无法使用含有dUTP的扩增引物以及无法使用含有dUTP的DNA作为扩增模板等诸多弊病。本产品配备了优化后的酶缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性，非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。

产品组分

运输和保存方法

冰袋运输。

-20℃保存。有效期一年。

产品应用

使用含dUTP的引物进行高保真文库扩增

使用含dUTP的模板进行高保真文库扩增

使用含dUTP的dNTP进行高保真文库扩增

质量控制

Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase（1 U/µL）

SDS-PAGE纯度：纯度＞95%；

核酸内切酶残留：50 µL反应中加入10 µL酶和1 µg φX174 RF I DNA，37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测RF II转化比率＜10%；

磷酸酶活性检测：在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 µL酶和2.5 mM对硝基苯磷酸，37℃下孵育4小时。经光谱测定法检测，405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰；

扩增性能检测：50 µL反应体系中加入1 µL本品，10 ng人基因组DNA以及0.5μM扩增引物扩增1 kb片段。30个循环后经琼脂糖凝胶电泳检测，有特异性1 kb扩增产物可见；

2×Canace® II Uracil PCR buffer

16小时孵育检测：50 µL反应体系中包含25 µL本品和1 µg HindIII-λDNA，37℃下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，条带无降解；50 µL反应体系中包含25 µL本品和1 µL T3 DNA，37℃下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，条带无降解；

磷酸酶活性检测：在磷酸酶活性检测缓冲液中加入2×Canace® II Uracil PCR buffer和2.5 mM对硝基苯磷酸，37℃下孵育4小时。经光谱测定法检测，405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase与常规高保真酶的使用方法略有不同。在使用前，请务必仔细阅读使用说明。

1. 推荐反应体系

所有操作应于冰上进行，2×Canace® II Uracil PCR buffer解冻后请充分混匀。体系配置之前请预热PCR仪，各组分添加完成之后用移液器吸打充分混匀并短暂离心至管底，然后置于预热的PCR仪中进行反应。所有组份使用完毕之后及时放回-20℃保存。

                   表1 PCR扩增反应体系  

【注】：

1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。

2）模板：使用纯化后的高质量DNA模板可以显著提高扩增效率和成功率；
3）dNTP：推荐dNTP使用终浓度为200 μM。试剂盒中提供的dNTP中不含dUTP，如特殊情况下需要制备含dUTP的模板，可自行额外添加dUTP至终浓度为400 μM。
4）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化，请勿超过2 U/50 μL。为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。

5）Mg2+终浓度：体系终浓度为2 mM。如有特殊需要，可向我公司咨询，要求提供低Mg2+浓度或不含Mg2+的buffer。

2．推荐反应程序

               表2 PCR扩增反应程序

【注】：

1）预变性温度和时间：推荐使用98℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；文库为1 min；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min；

2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状；

3）延伸温度和时间：推荐使用72℃。延伸时间根据实际需要进行调整；