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Hieff Canace® II High-Fidelity DNA Polymerase

Product Introduction

Hieff Canace® II High-Fidelity DNA Polymerase

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity DNA Polymerase	YB036G	100 U	653.00
Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity DNA Polymerase	YB036G	500 U	2453.00

产品描述

Hieff Canace^® II High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。该酶主要为NGS文库扩增所设计，克服了扩增不同GC含量模板带来的GC-bias，同时扩增效率比第一代的Canace高1.5倍，文库扩增产量大幅增加。本产品配备单独的buffer，并增加了特殊的扩增促进剂，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性。此产品与我公司文库扩增模块2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification (Cat#12621)所用酶原料一致。

产品组分

编号	组分	规格
编号	组分	10140ES60（100 U）	10140ES76（500 U）
10140-A	Hieff Canace® II High-Fidelity DNA Polymerase（1 U/μL）	100 μL	500 μL
10140-B	2×Canace® II PCR buffer (含Mg2+，dNTPs)	1 mL×3	1 mL×15

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制

核酸外切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA –Hind III，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入2 U本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存，有效期2年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

使用方法

在使用前，请务必仔细阅读使用说明。

1、PCR反应体系（推荐冰上配制）

表1 PCR扩增反应体系

组分	体积
ddH2O	to 50 μL
2×Canace®Ⅱ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs)	25 μL
模板或接头连接产物	X
NGS Primer 1 (10-25 μM)	X μL
NGS Primer 2 (10~25 μM)	X μL
Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL)	1 μL

【注】：1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀；
2）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化；
3）Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索；
4）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

2、PCR扩增程序

表2 PCR扩增反应程序

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98°C	1 min	1
变性	98°C	10 sec	1~15（根据实验要求）
退火	60°C	30 sec
延伸	72°C	30 sec
终延伸	72°C	5 min	1
Hold	4°C	Hold	-