Hieff NGS® UltimaTM Endprep Mix 快速末端修复/A尾添加模块

产品信息

产品描述

Hieff NGS^® Ultima^TM Endprep Mix是针对Illumina^®与MGI^®高通量测序平台文库构建而专业设计的DNA末端修复/A尾添加模块，具有高效、快速、易实现自动化的优势。本产品兼容500 pg-1 μg片段化Input DNA，可在单管内实现片段化DNA的末端补平、5'端磷酸化和3'端加A尾反应，得到5'末端含磷酸基团且3'末端带有dA突出的DNA产物。该产物无需纯化，即可使用Hieff NGS^® Ultima^TM DNA Ligation Module（Cat#12604）进行文库构建接头连接反应。

本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

产品组分

质量控制

1. SDS-PAGE纯度：>95%。

2. 核酸内切酶活性：50 μL反应体系中加入10 μL本酶和1 μg φX174 RF I DNA，37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率<10%。

3. 磷酸酶活性：在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 μL本酶和2.5 mM对硝基苯磷酸，37°C孵育4小时。经光谱测定法检测，405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。

4. 功能活性：在1×Endprep Mix中加入1 μL本酶和0.5 μg包含5'和3'突出末端的片段化DNA，25°C孵育20分钟。经毛细管电泳检测，末端修复、加dA尾并磷酸化的DNA比率>95%。

测序验证

本品与Hieff NGS^® Ultima^TM DNA Ligation Module（Cat#12604），2×Super Canace^® II High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，已通过Illumina^®高通量平台测序验证其有效性。

本产品与Hieff NGS^® Ultima^TM DNA Ligation Module（Cat#12604），2× Ultima HF Amplification Mix for MGI^® （Cat#13344）共同用于DNA文库构建，通过MGI^®高通量平台测序验证其有效性。

运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存，有效期1年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 将表1中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。

表1 末端修复/dA尾添加PCR反应体系

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表2所示反应程序，进行末端修复/dA尾添加反应。

表2 末端修复/dA尾添加PCR反应程序

5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module（Cat#12604）试剂盒，进行接头连接实验。