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Hieff NGS® Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent 快速片段化/末端修复/A尾添加模块

Product Introduction

Hieff NGS® Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent 快速片段化/末端修复/A尾添加模块

产品信息

^产品名称

^产品编号

^规格

^{价格（元）}

^{Hieff NGS® Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent}

^{快速片段化/末端修复/A尾添加模块}

^YB046G

^{24 T}

^1462.00

^YB046G

^{96 T}

^5362.00

产品描述

Hieff NGS^® Fast-Pace^TM DNA Fragmentation Reagent是针对Illumina^®与MGI^®高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，将片段化模块与末端修复/加A模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。可应用于500 pg-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本，在单管内实现DNA的片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化，即可使用Hieff NGS^® Fast-Pace^TM DNA Ligation Module（Cat#12607）或Hieff NGS^® Ultima^TMDNA Ligation Module（Cat#12604）进行文库构建中接头连接反应。

产品组分

^组分编号	^组分名称	^{24 T}	^{96 T}
¹²⁶⁰⁹	^{Smearase® Mix}	^{240 μL}	^{960 μL}

运输与保存方法

^{冰袋运输。}

^{-20℃保存，有效期1年。}

注意事项

^{1. 本试剂盒兼容范围为500 pg – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高质量Input DNA。}

^{2. 若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将DNA稀释在ddH2O或不含EDTA的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化。}

^{3. 对于常规的高质量基因组DNA，酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种GC含量的模板。}

^{表1 常规基因组DNA片段化时间推荐表}

^{插入片段主峰大小}	^{片段化时间}	^优化范围
^{600 bp}	^{5 min}	^{3-8 min}
^{350 bp}	^{8 min}	^{5-12 min}
^{250 bp}	^{10 min}	^{8-15 min}
^{200 bp}	^{13 min}	^{10-20 min}
^{150 bp}	^{20 min}	^{12-25 min}

^{【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。}

^{4. 参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。}

^{5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。}

使用方法

^{DNA片段化/末端修复/dA尾添加（DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing）}

^{该步骤将基因组DNA片段化，同时进行末端修复及dA尾添加。}

^{1. 将表2中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。}

^{2. 于冰上配制表2反应体系。}

^{表2 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系}

^名称	^{体积（μL）}
^{Input DNA}	^x
^{Smearase® Mix}	¹⁰
^ddH2O	^{Up to 60 μL}

^{3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。}

^{4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表3所示反应程序，进行DNA片段化，末端修复及dA尾添加反应。}

^{表3 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序}

^温度	^时间
^热盖105°C	^On
^4 °C	^{1 min*}
^{30 °C}	^{3-20 min**}
^{72 °C}	^20 min
^4 °C	^Hold

^{【注】：*DNA片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置4℃，待模块温度降至4℃时，将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA，酶切时间参考表1。}

^{5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module（Cat#12604）或Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）试剂盒，进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。}

参考实例

^{使用Hieff NGS® Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent对小牛胸腺gDNA样本进行酶切，片段化结果见图1。}