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Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒

Product Introduction

Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒	YB042P	50 T	433.00
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒	YB042P	200 T	1453.00

产品描述

动物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强、操作简易。

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA，如昆虫足翅、鼠尾、鼠趾、动物皮肤和内脏等。裂解产物可以用于DNA提取纯化、也可以直接用于PCR反应、也可以在-20℃或以下温度条件下长期保存备用。

本试剂盒中提供的2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很强的扩增兼容性，不需要额外采用纯化提取试剂去除裂解产物中的各种残骸杂质，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化扩增步骤的操作过程，降低污染几率。

该试剂盒可用于动物基因扩增检测、转基因动物基因型鉴定等。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格		储存
编号	组分	YB042P（50 T）	YB042P（200 T）	储存
10184-A	Lysis Buffer	10 mL	20 mL × 2	室温或4℃
10184-B	Proteases	100 μL	400 μL	-20℃
10184-C	2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)	500 μL	1 mL×2	-20℃

a）Lysis Buffer 和Proteases两种组分配合使用于动物组织裂解；

b）2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含PCR扩增所需要的热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和Mg²⁺等；已混有溴酚蓝染料作为电泳指示剂， PCR产物可以直接进行电泳。

运输方法

冰袋运输。

保存方法

1. 试剂10184-A【Lysis Buffer】为动物组织裂解缓冲液，在常温下，可保存12个月。

2. 试剂10184-B【Proteases】为动物组织裂解剂，使用时请勿长久开盖，建议保存于-20℃，避免反复冻融。

3. 试剂10184-C【2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)】，建议保存于-20℃，避免反复冻融。

操作方法

样品基因组DNA释放

1. 在离心管中加入200 μL Lysis Buffer，2 μL Proteases，轻轻涡旋混匀；

2. 取约10 mg动物组织，置于上述离心管中，轻轻涡旋混匀。

3. 55℃孵育5-30 min，然后95℃处理10 min。

4. 12000 rpm离心5 min。

5. 将上清转移至新的离心管，4℃或-20℃保存或直接用于PCR扩增。

【注】：

a）Lysis Buffer与Proteases混合后尽快使用，不宜长期保存；大量样本操作时，可以将Lysis Buffer与Proteases按100 μL:1 μL的比例混匀备用。

b）组织应取少量并尽量剪碎，以便裂解反应更顺利进行；鼠尾组织可以取1-5 mm；皮肤内脏等可以取约一粒米大小碎块。

c）55℃孵育，一般5 min即可满足多数PCR需求，如鼠尾、鼠耳等组织；若需要的DNA量较大或样品较难裂解，可将时间延长至30 min或更久；组织块不需完全裂解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

PCR反应鉴定——PCR反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
2× Tissue Direct PCR Mix(With Dye)	10	1×
Forward Primer (10 μM)	0.5	0.25 μM
Reverse Primer (10 μM)	0.5	0.25 μM
裂解产物（DNA模板）	1	-
ddH₂O	To 20	-

【注】：各组分使用前应充分混匀。

a）模板使用量：建议1-10%总体系。避免超过总体系的20%。

b）引物终浓度：推荐使用0.2-0.25 μM。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。

c）反应体系：推荐使用20 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

e）对照反应：建议进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

PCR反应鉴定——PCR反应条件

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	5 min	1
变性	94℃	5 sec	35（推荐25-40 ）
退火	50-65℃	5 sec
延伸	72℃	5 sec
终延伸	72℃	5 min	1

【注】：

a）退火温度：请参考引物的理论Tm 值，退火温度可设置低于引物理论值5℃，或通过梯度PCR确定最佳温度；

b）延伸时间：需要根据片段的长度来确定，对于1 kb以内的DNA片段，建议延长时间为5 sec；对于1 kb及以上的片段可以按15 sec/kb设置延伸时间。

注意事项

1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率；

2. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率最佳；

3. 本试剂盒仅供经过科研训练的实验人员使用，非实验人员或未经相应培训的人员请在监管下使用，勿独自使用；

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。

常见问题与解决方法

常见问题	可能原因	解决方法
阳性对照、待测样本均无条带。	PCR反应体系或反应条件不合适。	使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。
	PCR试剂保存不当失去活性。	2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
	引物设计问题。	尝试重新设计引物进行检查。
阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。	不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。	使用新鲜的试剂。
	加入组织裂解液过量。	增大反应体系，或减少裂解液的用量。
	样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。	裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
	模板加入量不适合。	在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。
	PCR循环数不足。	适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。
非特异性扩增	PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。	增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。
	PCR引物错配。	重新设计PCR引物。
	配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。	PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。
阴性对照出现目的条带	操作工具或试剂污染。	实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
阴性对照出现目的条带	样本间交叉污染。	每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。