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Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶
Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶
Product Introduction

Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶


产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶 

YB080P

1000U

936.00


产品描述

Alkaline Phosphatase,中文名碱性磷酸酶,可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除,常用于阻止载体的自连作用:在分子克隆实验中,DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团,因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止,提高了目的片段插入率。另外,碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板,以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。

本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶,可以降解几乎所有磷酸单酯,但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。


产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

YB080P(1000 U)

10321-A

Alkaline Phosphatase (30 U/μL)

1000 U

10321-B

10×AP buffer

1 mL


产品性质

来源(Source)

携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母

质量控制(Quality Control)

无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染

热灭活(Thermal Inactivation)

在螯合剂存在下,65℃加热30 min,99%活性不可逆丧失;使用苯酚,可使酶完全失活。

储存液条件(Storage   conditions)

10 mM Tris-HCl(pH8.0),1 mM MgCl2,50 mM KCl,0.1 mM   ZnCl2,50% glycerol.

活性定义(Unit definition)

在pH9.8,37℃条件下,以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物,1分钟生成1 µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。

最佳pH(Optimal pH)

该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10,在底物浓度低时,最佳pH为8,此时该酶活性较高浓度底物时稍低。

优化体系(Optimal Buffer)

AP Buffer(500 mM Tris-HCl pH9.0,10 mM   MgCl2)


运输和保存方法

干冰运输。-20℃保存,本酶在保存条件下极其稳定。


注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

1 DNA去磷酸化

① 在1.5 mL离心管中加入下列试剂:

组分

体积

无菌ddH2O

Up to 50 µL

DNA 片段*

1-20 pmol

Alkaline   Phosphatase

1-2 µL

10×AP buffer

5 µL

【*】单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育,平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。

② 混匀上述试剂,于37℃或50℃孵育30 min。或者37℃孵育15 min后,再于50℃孵育15 min。


2 酚氯仿法抽提DNA

① 苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提2次。

【注】推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA,0.5% SDS,50 μg/mL Proteinase K的溶液中56℃孵育30 min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10 min,灭活效果更佳。

② 氯仿/异戊醇(24:1)抽提。


3 乙醇沉淀DNA

① 加入2.5 µL 3 M NaCl(终浓度150 mM)。

② 加入125 µL(2.5倍体积)预冷乙醇,混匀后于-20℃放置30-60 min,沉淀DNA。


4 溶解DNA

离心,彻底去除乙醇后,将DNA溶于适量去离子水(<20 µL)。



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