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Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 小鼠组织直接PCR试剂盒

Product Introduction

Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 小鼠组织直接PCR试剂盒

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)	YB043P	50 T	323.00
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)	YB043P	200 T	983.00

产品描述

本试剂盒可直接快速地对小鼠组织（如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肌肉等）样本进行PCR扩增，具有极强的样本兼容性。本试剂盒配备了强力的裂解缓冲液，可以快速裂解样品，释放基因组DNA。裂解液可以直接加入到PCR反应体系中，无需精提纯化，操作方便。此外，本试剂盒对样品投入量要求低，5 mg小鼠组织或1-5 mm鼠尾即可进行实验。

本试剂盒提供的2× Mouse Direct PCR Mix为2倍浓度的热启动PCR反应液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。

该试剂盒可用于转基因鉴定、小鼠基因分型等。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	YB043P（50 T）	YB043P（200 T）
10185-A	Buffer ML	1 mL×5	20 mL×1
10185-B	Buffer MT	0.6 mL	1.25 mL×2
10185-C	2× Mouse Direct PCR Mix	500 μL	1 mL×2

a)Buffer ML 为裂解缓冲液，包含了强力蛋白变性剂，请戴手套操作。

b)Buffer MT 为终止缓冲液，用以终止Buffer ML的裂解功能。

c)2× Mouse Direct PCR Mix：包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂、稳定剂和电泳指示染料等。

运输方法

冰袋运输。

保存方法

1. 组分A：2-8℃保存，有效期1年。使长时间多次使用，请分装冻存，避免交叉污染。
2. 组分B/C：-20℃保存，避免反复冻融。有效期1年。

操作方法

样品基因组DNA释放

1. 剪取5-10 mg动物组织或1-5 mm鼠尾，置于1.5 mL离心管中；

2. 在上述离心管中加入90 μL Buffer ML，轻轻涡旋使得样品完全被裂解液浸润，短暂离心；

3. 在恒温孵育仪中设置95℃孵育15 min；

4. 加入10 μL Buffer MT，轻弹混匀，终止裂解;

5. 选做步骤：12000 rpm离心2 min；

6. 将上清转移至新的离心管，4℃或-20℃保存或直接取上清用于后续PCR扩增。

【注】：组织应尽量剪碎，以便裂解反应更顺利进行。

【注】：95℃孵育，一般15 min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难裂解，可将时间延长至30 min。组织块不需完全裂解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

PCR反应鉴定——PCR反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
2× Mouse Direct PCR Mix	10	1×
Forward Primer (10 μM)	0.5	0.2-0.4 μM
Reverse Primer (10 μM)	0.5	0.2-0.4 μM
裂解产物（DNA模板）	1	-
ddH2O	补足至 20 μL	-

【注】：各组分使用前应充分混匀。

a）模板使用量：建议按1-10%总体系量取用模板，20 μL体系建议采用1 μL上清液作为模板；

b）引物终浓度：0.2-0.4 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度；

c）反应体系：推荐使用20 μL，也可根据使用习惯调整体系体积大小；

d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

PCR反应鉴定—PCR反应条件

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	5 min	1
变性	94℃	10 sec	35
退火	60℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	5 min	1

【注】：a）退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。

b）延伸时间：请按30 sec/kb设定。

c）扩增循环数：35个循环已可以扩增足量产物。

d）电泳上样：取3-5 μL扩增产物上样即可。

对照反应

在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

注意事项

1.为了避免样本间交叉污染，每次取样后都需要将取样器材的刃口或与样本直接接触的部位浸入2%次氯酸钠溶液中，反复洗刷数次进行清洗，然后用干净的纸巾擦干残余液体后再进行使用。为了试验方便，也可准备多个取样器材，在使用完后进行统一清洗，确保每一单独样本均使用的是无污染的取样器材。

2. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
3. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率最佳。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

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常见问题与解决方法

常见问题	可能原因	解决方法
阳性对照、待测样本均无条带。	PCR反应体系或反应条件不合适。	使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。
	PCR试剂保存不当失去活性。	2× Mouse Direct PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
	引物设计问题。	尝试重新设计引物进行检查。
阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。	不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。	使用新鲜的试剂。
	加入组织裂解液过量。	增大反应体系，或减少裂解液的用量。
	样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。	裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
	模板加入量不适合。	在反应体系1-10%范围内优化模板加入量。
	PCR循环数不足。	增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。
非特异性扩增	PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。	增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。
	PCR引物错配。	重新设计PCR引物。
	配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。	PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。
阴性对照出现目的条带	操作工具或试剂污染。	实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
阴性对照出现目的条带	样本间交叉污染。	每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。