Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL)

产品信息

产品描述

Hieff^® Gold T4 DNA Ligase在ATP做辅酶的情况下可催化dsDNA 平末端或粘性末端相邻核酸的5’磷酸末端和3’羟基末端形成磷酸二酯键，还可催化RNA和双链中的ssDNA 或RNA 链连接，但不能催化全单链核苷酸间的连接。

本品主要适用于标记RNA 3’-末端，环化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。

产品组分

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。

单位定义

在20 μL的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ 分解物在16℃下反应30 min时，催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制

核酸外切酶残留检测：30 U的本品和0.6 μg λ-Hind III在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测：30 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反应1小时，DNA电泳谱带不发生变化。

注意事项

1）Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 在无菌微量离心管中配制以下反应体系：

注：平末端载体与DNA片段进行连接时，应先将载体进行去磷酸化处理，以防发生自连接现象。为提高连接效率，每20 µL反应体系中可以加2 µL 50% PEG 4000。

2. 16℃反应过夜。

3. 转化实验

1）将连接产物加入到100 µL 感受态细胞中（连接产物不应超过感受态细胞的1/10），轻弹混匀，冰上孵育30 min。

2）将离心管于42℃，热激90 sec（不要晃动），之后立刻置于冰水浴静置2-3 min。

3）向离心管中加入900 µL LB或SOC培养基，37℃，150 rpm，振荡培养45 min，该过程使菌体复苏，抗性基因表达。

4）2500 g 离心5 min，吸去900 µL上清，用剩余培养基重悬菌体，用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。

注：如果使用超级感受态细胞（转化效率＞10⁸ cfu/µg），可直接吸取100-200 µL 37℃孵育后的菌液涂板，剩余菌液可在4℃保存，1周内均可重新涂板。